抑菌试验详细步骤 抑菌效果检测方法

301次 2024.07.05

    抑菌是指抑制细菌生长和繁殖,使细菌的数量不会增长。抑菌不一定能杀灭细菌,但能防止细菌数量过多而导致危害。抑菌试验是一种常用的实验方法,用于评估抗菌剂的抑菌效果。其基本原理是将待测物质与细菌接触,观察其对细菌生长的影响。


    抑菌试验详细步骤


    抑菌圈测量是微生物分析的经典方法。它是利用抑菌物质在涂布特定试验菌的琼脂培养基内成球形立体状扩散,抑制试验菌的繁殖,在抑菌物质的周围形成透明圈,即抑菌圈。抑菌圈的测定(滤纸片法)详细步骤如下:


    1、菌种接种:将保存菌种反复转种2次,使菌种新鲜,细菌置30℃,恒温培养箱培养1d,霉菌置27℃,恒温培养箱培养3d,备抗菌实验用


    2、菌悬液制备:在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL),接种环轻刮菌落,摇晃,置旋涡混合器混匀。


    3、倒平板:在超净台里将培养基倒入平板,每板约15mL左右,水平放置,凝固后倒置放入30℃恒温培养箱中,2d后观察是否有菌落生长,若没有则可供下一步实验使用,否则需重新倒平板。


    4、涂布:在超净台里用枪取0.1ml菌悬液注入平板,放置5min左右后用三角耙涂布均匀,每种菌设置两个重复平板。


    5、贴片:在超净台里将平板平均分为6个区,对角设置平行组,同时用无菌水做对照组,硫酸链霉素(10U)作阳性对照。每两张滤纸片(直径1.1cm或0.6cm)为一贴,用镊子夹着滤纸片在样品中轻轻蘸一下后,取出贴在平板的位置,轻摁一下使滤纸片牢固,置(正放)4℃冰箱中放24h。


    6、培养:24h后放入(倒置)恒温培养箱中培养,细菌30℃,霉菌27℃。细菌培养24h后观察结果,霉菌72h后观察结果。


    抑菌效果检测方法


    1.纸片扩散法:将待测物质涂在纸片上,放置在含有细菌的琼脂平板上,观察纸片周围的细菌生长情况,评估抑菌效果。


    2.微量稀释法:将待测物质按照一定比例稀释,与细菌混合,放置在琼脂平板上,观察细菌生长情况,根据最小抑菌浓度评估抑菌效果。


    3.漏斗法:将待测物质滴入含有细菌的培养基中,通过漏斗筛选,观察细菌生长情况,评估抑菌效果。


    4.悬浮液法:将待测物质与细菌混合,放置在离心管中,离心后观察沉淀情况,评估抑菌效果。


    以上是几种常用的抑菌试验方法。不同的方法适用于不同的实验需求。在进行抑菌试验时,需要注意实验条件的控制,以保证实验结果的准确性。


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